凝膠成像由CCD攝像系統(tǒng)和暗箱組成的硬件和不斷發(fā)展的計算機軟件組成。
1．硬件的發(fā)展
(1)CCD影像系統(tǒng)：這是凝膠成像分析系統(tǒng)的核心裝置。CCD是一種矽晶片，能將光的影像元素轉(zhuǎn)換為電子量，使影像數(shù)值化以后作為電腦影像處理或儲存。 ccD有videoCcD相機和高性能ccD相機兩種。前者即電視規(guī)格攝像機，通常用于一般影像分析，但無數(shù)值影像處理功能。后者為科學用CCD系統(tǒng)，可以獲得高解析度，高動態(tài)范圍，低噪聲的影像，特別是近幾年使用的冷卻式ccD攝像系統(tǒng)，大大降低了暗電荷，幾乎達到無噪聲的境界。其分辨率可以從幾十萬達到幾百萬個圖像元素。
(2)暗箱：現(xiàn)代已由簡單的紫外線uV透射暗箱發(fā)展成為多功能的暗箱，箱內(nèi)雙側(cè)安裝白燈，可以進行反射分析，也可以安裝254衄反射uV燈，用于TLC板分析，黑板上擱置白板，可以進行白光透射的測量。
2．軟件的發(fā)展
針對生命科學的多種實驗要求，不斷發(fā)展升級的計算機軟件，是凝膠成像分析系統(tǒng)成為當代生物化學與分子生物學實驗研究*的主要設(shè)備原因。
(1)1D區(qū)帶分析：一維軟件可分辨50多條區(qū)帶，根據(jù)峰圖顯示，可以準確的選定峰值，刪除泳帶的拖尾現(xiàn)象，獲得比較準確的積分吸光度，進行定量計算，如圖一蛋白質(zhì)的分析。
（圖一）蛋白質(zhì)的分析圖像
(2)分子量(MW)與遷移率(RF)的計算：電泳和層析形成的區(qū)帶和斑點，其RF值可以自動進行測定計算。蛋白質(zhì)和核酸(DNA和RNA)的MW，在有標準分子量的區(qū)帶存在下，可以直接自動計算。蛋白質(zhì)的標準分子量一般有高、中、低三種，DNA的標準分子量有DNAEcoRⅠ和DNAHindⅢ及100b kb等幾種。若軟件內(nèi)無所需的標準時，可重新編輯輸入。如圖二與表1 DNA的分析結(jié)果。
（圖二）酵母染色體DNA的分析圖像（泳道1為標準DNA分子量）
(3)斑電的分析有圓形和矩形分析兩種方法。據(jù)斑點大小，可以調(diào)整半徑、長短邊，獲得每個斑點積上的積分光密度。
(4)2D點密度分析，是近年來針對生命科學發(fā)到后基因組時代，出現(xiàn)的蛋白質(zhì)組分析設(shè)計的軟件此軟件可選定區(qū)域設(shè)定灰度、計算光密度、確定像素對上千個雙向電泳斑點進行量的分析。如圖三對雙向電泳的分析。更高一級2D軟件，能自動識別、定量比較2D蛋白質(zhì)凝膠圖像，自動計算2D凝膠匕蛋白質(zhì)點的分子量和PI值，進行蛋白質(zhì)匹配，與自動切割蛋白質(zhì)點工作站相連接，快速進行蛋白質(zhì)組的分析。
（圖三）蛋白質(zhì)的雙向電泳
在線客服
電話咨詢